農(nóng)藥已經(jīng)成為了中草藥中主要的外源性有害殘留物之一，帶來的潛在安全問題影響了中藥行業(yè)的持續(xù)發(fā)展。因此，加強(qiáng)中藥中農(nóng)藥多殘留的分析新技術(shù)研究對保證其質(zhì)量安全是非常必要的。本文將綜述各種分析方法在中藥材農(nóng)殘分析中的應(yīng)用現(xiàn)狀，對目前各種技術(shù)的關(guān)鍵步驟進(jìn)行總結(jié)、介紹和比較。

　　隨著農(nóng)藥殘留分析領(lǐng)域樣品前處理方法的逐漸成熟，農(nóng)藥殘留的檢測方法也多種多樣，目前較常用的方法主要為氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、毛細(xì)管電泳法、免疫分析法和生物傳感器技術(shù)等。

　　一、氣相色譜法

　　氣相色譜法(GC)是一種以氣體為流動相的一種色譜分離分析方法。在中藥農(nóng)殘的分析中，氣相色譜法常與火焰離子化檢測器[1]、火焰光度檢測器(FPD)[2-3]、電子捕獲檢測器(ECD)[3-4]和質(zhì)譜檢測器(MS)[3]聯(lián)用。Du J J等[1]將超聲波輔助提取與分散液液微萃取技術(shù)聯(lián)合用于樣品提取，采用氣相色譜-火焰離子化檢測器進(jìn)行樣品分析，建立了梨汁中氯氰菊酯、芐氯菊酯殘留的分析方法。鐘瑤等人[2]利用乙酸乙酯超聲輔助提取、石墨化炭黑凈化，GC-FPD法測定濕毒清片中的14種有機(jī)磷。

　　中醫(yī)藥評職知識：中藥學(xué)領(lǐng)域sci期刊有哪些

　　2020年中華人民共和國藥典(四部)[3]中農(nóng)藥殘留測定方法中，針對不同類型的農(nóng)藥共有五種檢測方法，五種檢測方法的共同缺陷均為所用到的試劑毒性較大且消耗較多，需要反復(fù)提取、凈化和濃縮;如第一法中采用二氯甲烷-丙酮-石油醚反復(fù)提取和凈化，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)兩次濃縮，結(jié)合GC-ECD方法測定植物性藥材和飲片9 種有機(jī)氯類農(nóng)藥，該方法的樣品前處理較復(fù)雜，且用到毒性較大的二氯甲烷，試劑消耗較多，但方法的靈敏度可以達(dá)到0.001mg/kg。葉江雷等人[4]采用分散固相萃取提取凈化、GC-ECD 測定個茶葉中六六六、敵敵涕、硫丹等茶葉中常見的20種農(nóng)藥殘留量，該方法的樣品提取無需濃縮，凈化液過膜后直接分析，可以在很大程度上節(jié)約處理時間，有一定的基質(zhì)干擾。

　　二、高效液相色譜法

　　高效液相色譜法在中藥制劑中農(nóng)藥多殘留的分析中占了非常重要的地位，常利用強(qiáng)大的色譜分離技術(shù)，與二極管陣列檢測器(DAD)[5]、熒光檢測器(FLD)[6]、質(zhì)譜檢測器(MS)[7]等聯(lián)用。高效液相色譜法(HPLC)是一種以高壓輸出的液體為流動相的色譜技術(shù)，具有高速、高效、高靈敏及自動化等特點(diǎn)。藏利國[5]采用正己烷和丙酮混合溶劑提取銀杏葉中的氯氰菊醋農(nóng)藥殘留，氟羅里硅土/活性炭柱凈化，LC-DAD分析。吳定芳等人[6]乙腈提取，SPE-NH2固相萃取小柱凈化，柱后衍生，LC-FLD法分析19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥。Jiachun Li等人[7]用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定三七止痛膠囊中的35種有機(jī)磷農(nóng)藥，采用分散固相萃取法凈化。

　　三、 高效毛細(xì)管電泳法

　　高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)是電泳與色譜相結(jié)合的一種現(xiàn)代色譜分離技術(shù)，原理是以毛細(xì)管為分離通道，高壓直流電場為驅(qū)動力，依據(jù)樣品中的各種待測組分之間的淌度和分配行為上的差異而進(jìn)行分離的微型液相分離技術(shù)。在中藥農(nóng)殘中，通常會借助毛細(xì)管電泳法的分離技術(shù)與紫外檢測器(UV)、電導(dǎo)檢測器(ECD)與質(zhì)譜檢測器(MS)[8-9]聯(lián)用。杜雪純等人[8]采用毛細(xì)管電泳質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，通過對緩沖溶液組成和質(zhì)譜條件的優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)了多菌靈、多效唑等 19 種有機(jī)氮類農(nóng)藥的有效分離，最后成功地測定了白芍樣品中 19 種有機(jī)農(nóng)藥殘留。劉銀[9]采用環(huán)糊精毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測定滅草唆、甲氧咪草煙、稀草酮和噸喘草銅對映體，該方法所需樣品用量少、運(yùn)行成本低、抗污染能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。

　　四、超臨界流體色譜法

　　超臨界流體色譜(SFC)是以超臨界流體作為流動相的色譜技術(shù)，其分離原理與 GC、LC 相似，根據(jù)樣品組分在流動相和固定相間的分配系數(shù)不同而實(shí)現(xiàn)分離。因為超臨界流體具備高擴(kuò)散性、低粘度、溶解能力強(qiáng)等特點(diǎn)，使得超臨界流體色譜的分離效能優(yōu)于 GC、LC、SFC 在農(nóng)殘分析中與各種氣相和液相色譜檢測器以及與質(zhì)譜聯(lián)用，主要用于熱不穩(wěn)定、低揮發(fā)性以及難以用氣相和液相色譜分離分析的農(nóng)藥品種。Ishibashi M 等人以超臨界流體色譜串聯(lián)質(zhì)譜法為色譜分析手段，建立了糙米、洋蔥和菠菜中 17 種農(nóng)藥殘留的分析方法。

　　五、免疫分析法

　　免疫分析法(IA)是利用抗體可與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的這一特殊性質(zhì)，將抗體作為生物化學(xué)檢測器對目標(biāo)化合物進(jìn)行定量和定性分析的一種技術(shù)。目前，用于農(nóng)藥分析的免疫分析方法主要是酶免疫分析法，其中酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)應(yīng)用于農(nóng)藥殘留檢測的報道較多，楊熠等人[12]采用聚乙二醇-6000制備抗恩諾沙星卵黃抗體，間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法檢測恩諾沙星。

　　六、 生物傳感器法

　　生物傳感器是用生物活性物質(zhì)(如酶、抗原)作為識別元件，對待測化合物具有高度選擇性的一種儀器分析新技術(shù)。與其他分析方法相比，生物傳感器具有不需要樣品前處理、特異性強(qiáng)、分析快速、操作簡單、價廉等特點(diǎn)。魏福祥等人采用乙酰膽堿酯酶生物傳感器方法測定蔬菜水果中對馬拉硫磷和甲基對硫磷，該方法與氣相色譜和液相色譜法進(jìn)行了對比，耗時較少，操作簡單。

　　各種分析方法在中藥農(nóng)藥殘留的對比

　　氣相色譜方法

　　氣相色譜方法是中藥農(nóng)殘中最常用的一種檢測方法，根據(jù)檢測器的不同可以特異性的檢測不同的對象、適用范圍廣、靈敏準(zhǔn)確;但該種方法的樣品前處理一般較復(fù)雜、試劑消耗多、儀器較昂貴，不適用揮發(fā)性低的農(nóng)殘的測定。

　　高效液相色譜法

　　高效液相色譜法在中藥農(nóng)殘的應(yīng)用僅次于氣相色譜法，適用于沸點(diǎn)高和對熱穩(wěn)定性差的農(nóng)藥，該種方法可以同時檢測526種農(nóng)藥殘留物，可以準(zhǔn)確定性和定量;但該種方法的樣品前處理法跟氣相色譜法一樣，同樣操作復(fù)雜、試劑消耗較多。

　　(三)其它四種分析方法

　　高效毛細(xì)管電泳法、超臨界流體色譜法、免疫分析法和生物傳感器法目前在中藥農(nóng)殘的應(yīng)用不如上述兩種方法廣泛，但這些方法具有所需樣品用量少、運(yùn)行成本低、耗時少、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)。

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　　作者：鐘艷琴，蘇望寧，伍鳳祥