本篇文章是由《河北果樹》發表的一篇農業論文，介紹落葉果樹品種資源、苗木繁育、果園建立、肥水管理、整形修剪、花果管理、病蟲防治、貯藏加工等方面的新技術、新成果等。主要欄目：專題論述、試驗研究、經驗交流、百花園、工作歷、廣告與信息。

　　摘要該研究以中國石竹2個品種的雄性不育植株帶芽莖段為初始外植體進行組織培養，篩選了適合其芽誘導、繼代增殖的培養基配方，并對試管苗移栽介質進行了挑選，成功地建立了2個中國石竹雄性不育植株的離體繁殖與保存體系。結果表明：中國石竹芽的最佳誘導培養基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L，最佳繼代增殖培養基為MS+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.1 mg/L，最適宜的試管苗移栽基質是珍珠巖。同時，2個不育材料組織培養繁殖后代仍表現為雄性不育，確保了原材料的雄性不育性狀的穩定性。

　　關鍵詞中國石竹;6-BA;離體繁殖;雄性不育

　　中國石竹(Dianthus chinensis)又稱石竹、洛陽花，是石竹科石竹屬的一種重要觀賞花卉，可扦插、分株繁殖，在園林中多用于花壇、花境、花臺或盆栽[1-2]。

　　植物雄性不育是植物在有性繁殖過程中不能產生正常可育雄配子體的遺傳現象，廣泛存在于開花植物中。雄性不育現象可分為細胞核質互作雄性不育和核雄性不育2種類型。此外，還包括主要由環境因子引起的形態不育和生理不育[3]。選育并保存石竹雄性不育系進行雜交制種，可免去人工去雄，節省大量的人力、物力，降低成本，并可提高雜交種子的純度，增加產量，擴大雜種優勢的利用范圍，具有極大的商業價值[4]。

　　該試驗采用2個中國石竹品種的雄性不育植株，通過莖段組織培養對其進行離體繁殖和保存，并對繁殖材料移栽后的育性進行觀察，以期了解其不育性狀的遺傳穩定性，并建立起穩定有效的繁殖與保存體系，為中國石竹不育性狀的后續研究和利用奠定基礎。

　　1材料與方法

　　1.1試驗材料

　　供試植株為中國石竹紫紅色和粉紅色2個品種分離出的雄性不育植株，取自湖北省林木育種中心。

　　1.2試驗方法

　　1.2.1材料的采集和消毒。從上述2種雄性不育植株上選取帶芽莖段(芽尚未萌動)作為外植體，剝去葉片，用自來水沖洗干凈后，在無菌環境下先用70%酒精消毒1 min，再用0.1%升汞溶液消毒8 min，無菌水沖洗4～5次，然后在無菌條件下進行接種。

　　1.2.2芽的誘導。將中國石竹的帶芽莖段切成2～3 cm長，接種于誘導培養基中進行培養，培養溫度25 ℃，光照時間14 h/d，光照強度2 000 lx(日光燈燈源)，定期觀察、記錄其分化情況。

　　根據6-BA的濃度不同，培養基配方分為3種(表1)(瓊脂濃度為7 g/L，蔗糖濃度為30 g/L，pH值6.0～6.5。培養基裝瓶后在121 ℃、1.1 kg/cm2高壓下滅菌20 min，下同)。每個品種每種培養基均做5個重復(玻璃瓶)，每個重復接4個外植體。重復3次。

　　莖段的繼代增殖。將培養15 d后分化出來的小苗切成帶有1個以上腋芽的莖段，轉接于繼代增殖培養基中(表2)，增殖4代，觀察不同濃度的6-BA對其不定芽分化的影響，并從中篩選出適合中國石竹快繁的最適培養基。每個品種每種培養基均做5個重復(玻璃瓶)，每個重復接4個外植體。重復3次。

　　1.2.4生根誘導。經過繼代增殖的不定芽生長至3～4 cm高時，將粗壯的莖段切成具1～2個節的莖段，轉接于生根培養基中，促進其生根。20 d后觀察統計苗的生根情況。

　　1.2.5試管苗的移栽。生根誘導25 d后開瓶煉苗7 d，即可進行移栽。選取健壯的試管苗，洗凈其根部附著的培養基，移栽到含營養土的營養缽中。移栽前基質采用高溫滅菌，栽后澆透水放于人工控溫箱中，保持濕潤。培養14 d可將移栽苗從人工控溫箱中取出，在自然條件下加強陽光照射14 d，隨后移入花盆定植于室外大棚中，盆土選擇通透性好的泥炭土。定植后應立即澆透水，觀察記錄成活株數。

　　1.2.6田間管理與育性觀察。將試管苗定植于花盆中10 d左右，澆1次肥水。在其花期階段，觀察移栽苗的生長特性和開花后育性，并確定其不育性狀的遺傳穩定性。

　　1.3數據處理與統計

　　誘導率(%)=對于百分數的數據，在進行方差分析之前將其轉換成平方根的反正弦。試驗數據通過SAS軟件進行方差分析和0.05水平下的LSD測驗，以判斷各處理間的差異顯著性，從而篩選出各階段最適宜的培養基或移栽基質。

　　2結果與分析

　　2.1芽的誘導

　　外植體培養7 d左右腋芽開始萌發，并且生長較快，20 d時對芽分化率和外植體平均出芽數進行記錄，因無論使用哪種培養基，每個外植體的芽分化率均為100%，故只對外植體平均出芽數進行方差分析。由表3可知，6-BA濃度間的處理存在極其顯著的差異，而品種間則無顯著差異。

　　由表4可知，處理A1誘導出的不定芽較健壯，但數量較少;處理A2外植體平均出芽數最高，出芽快且苗生長健壯，基本無玻璃化現象產生;處理A3誘導出的苗容易發生玻璃化，從而減少了有效苗的數量。因此，6-BA在1.0 mg/L時是最適宜的濃度水平。

　　2.2莖段的繼代增殖

　　由表5可知，6-BA濃度間的處理存在極其顯著的差異，而品種間則無顯著差異。

　　6-BA的濃度在0.1～0.5 mg/L的范圍內均可以誘導腋芽萌動，但在不同濃度的6-BA的作用下，芽的生長狀況差異很大。由表6可知，處理B1芽的增殖倍數最低，且容易產生玻璃化;處理B3芽的增殖倍數最高，分枝能力最強，但是其增殖產生的小苗生長細弱，且容易產生愈傷組織;處理B2小苗生長健壯，畸形化現象少，且處理B2、B3間無顯著差異。故6-BA濃度為0.3 mg/L時，是最適合中國石竹快繁繼代增殖的培養基[5]。

　　2.3試管苗的移栽

　　培養7 d左右莖段切口處開始膨大，漸漸出現淺黃色的瘤狀突起(根原基)，14 d后白色的根開始萌發伸長，25 d左右根可長至3.5～5.0 cm，呈輻射狀，有須根。將生根后的試管苗移栽至栽培基質中培養。

　　移栽基質也是影響移栽成活率的重要因素之一[6]，尤其對草本植物的影響較大。在保持空氣濕度的條件下，珍珠巖能給根系提供良好的通氣條件，可以防止雜菌污染，且因中國石竹喜陽光、高燥、通風、涼爽環境，性耐寒，忌濕澇和黏土，故珍珠巖為中國石竹移栽最適宜的基質。

　　2.4育性觀察

　　試管苗移栽生長20~30 d后上盆或定植，30 d左右即可開花。在開花期觀察再生苗的花器官形態特征，發現其花色從初花期到盛花期由深變淺，所有花器官形態在花萼、花瓣方面與其他可育植株沒有差異，而二叉雌蕊(少有3叉雌蕊)比可育植株的長、粗壯且張開角度大，從外觀看完全無雄蕊;將花朵縱向切開后可以看到，雄蕊的花絲短縮在花冠筒內，無花藥，或雖有花藥但花藥中無花粉粒，或者只有少數干癟的花粉粒。由此可確定其全部為雄性不育植株，保持了原材料的不育性狀。

　　3結論與討論

　　3.16-BA對中國石竹莖段腋芽分化的影響

　　對大量植物的組織培養研究表明，細胞分裂素中應用最多的是6-BA，用量一般為1.0～2.0 mg/L最適宜。該試驗表明，中國石竹其腋芽分化所需的6-BA的濃度較低，僅1.0 mg/L，而增殖只需要0.3 mg/L，且芽生長較健壯，增加6-BA的濃度反而會抑制芽的生長，甚至導致變態芽的發生[7]。

　　3.2中國石竹試管苗的玻璃化情況

　　該試驗中經常會出現玻璃化的現象，是中國石竹組織培養中的一大障礙，這與培養基、培養條件均有關系[8]。據觀察，繼代轉接時，每瓶接入的小苗過多，苗過分擁擠，試管苗容易玻璃化，此時小苗徒長，細弱瘦長，葉片和莖呈半透明狀，下部葉片枯黃脫落，造成苗基部光禿。另外，超過1個月沒有及時繼代培養的小苗容易玻璃化。

　　前人的研究表明，導致玻璃化發生的因素很多，如無機鹽類、碳水化合物、瓊脂、生長調節劑、培養容器封口、光照、培養溫度和濕度等因素，但影響不同植物的主導因素可能各不相同[8-9]。克服中國石竹玻璃化的措施還有待進一步研究。

　　3.3 材料雄性不育性狀的遺傳穩定性

　　在試驗的繼代增殖過程中，共繼代了4次，相當于在原始材料的基礎上繁殖了4代，而最后的試管苗仍為雄性不育的，說明雄性不育性狀并未因繁衍次數的增多而發生變異，同時也未受到試驗過程中植物生長調節劑(主要是6-BA、IBA與NAA)的影響，進一步確定了此性狀的遺傳穩定性。

　　通過對雄性不育和可育石竹材料的花器官形態比較，發現雌蕊也存在很大差別，其二叉雌蕊(少有3叉雌蕊)比可育植株的長、粗壯且張開角度大，這樣可能有利于其接受外來花粉。這種形態的變化可能就是由于其雄蕊的敗育引起的，它在開花期不能像可育植株那樣接受自花授粉。因此，雌蕊就特化成能更利于接受外來花粉的形態，保證其繁衍后代的能力。

　　4參考文獻

　　[1] 包滿珠.花卉學[M].2版.北京：中國農業出版社，2003：186-187.

　　[2] 韋三立.花卉組織培養[M].北京：中國林業出版社，2001：128-129.

　　[3] 劉忠松，官春云，陳社員.植物雄性不育機理的研究及應用[M].北京：中國農業出版社，2001：1-2.

　　[4] 杜召鳳，方帥軍，尚亞南.植物雄性不育機制探究[J].阜陽師范學院學報：自然科學版，2004，21(1)：7-10.

　　[5] 周長東.香石竹組培快繁技術的研究[J].山西林業科技，2005(2)：10-11，18.

　　[6] 郝玉華.組培苗馴化移栽基質研究[J].江蘇農業科學，2005(5)：79-81，99.

　　[7] 王冬梅，黃學林.細胞分裂素類物質在植物組織培養中的作用機制[J].植物生理學通訊，1996，32(5)：373-377.