摘要目的:利用正交設(shè)計(jì)優(yōu)選出大麻藥總皂苷提取工藝.方法:在單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，以大麻藥總皂苷提取率和純度為考察指標(biāo)，設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，考察乙醇濃度、料液比、提取時間和提取次數(shù)對大麻藥總皂苷提取的影響.結(jié)果:大麻藥總皂苷提取的最佳工藝為乙醇濃度90%，料液比1∶10，提取時間2h，提取次數(shù)2次.結(jié)論:該工藝穩(wěn)定，所得總皂苷提取率及純度較高，可為大麻藥總皂苷的工業(yè)化生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù).

　　關(guān)鍵詞正交設(shè)計(jì);大麻藥;總皂苷;提取工藝;單因素

　　大麻藥(RadixDolichosae)為豆科植物鐮扁豆(DolichosappendiculatusHand.-Mazz)的干燥根.鐮扁豆別名麻三段、大九莢、鐮葉山扁豆等，主要分布于云南、四川、甘肅、廣東等地，尤以云南為多.本品性辛、麻、溫，有小毒[1，2]，歸肺、心經(jīng).具有“通氣活絡(luò)，活血止血，消腫止痛，接骨生肌”的功效[3].現(xiàn)代研究還發(fā)現(xiàn)大麻藥具有利尿、抗痛風(fēng)、抗腫瘤、抗癌等功效[4-7]，其主要化學(xué)成分為三萜皂苷、生物堿、黃酮等[8-13].痛風(fēng)是嘌呤代謝紊亂引起的一種代謝性疾病。近年來，隨著生活習(xí)性與飲食結(jié)構(gòu)的改變，痛風(fēng)的發(fā)病率呈逐年上升和年輕化趨勢.目前痛風(fēng)的治療還局限于緩解急性期的疼痛，和降低血尿酸濃度.而臨床所用一線藥多具不良反應(yīng)[14]，前期研究發(fā)現(xiàn)大麻藥總皂苷在抗痛風(fēng)和治療心血管系統(tǒng)等疾病方面發(fā)揮重要功效，且含量較高.本實(shí)驗(yàn)旨在探究大麻藥總皂苷提取的最佳工藝[15，16]，為工業(yè)化生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù).

　　1儀器與材料

　　旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、恒溫水浴鍋(上海亞榮);循環(huán)水式多用真空泵(上海貝茵);DHG-9030A鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒);UPH-I-10T實(shí)驗(yàn)室超純水制造系統(tǒng)(成都優(yōu)普);電子天平(奧豪斯儀器);紫外分光光度計(jì)(UV-1800PC，Mapada).大麻藥經(jīng)中南民族大學(xué)藥學(xué)院陳旅翼副教授鑒定為豆科植物鐮扁豆(DolichosappendiculatusHand.-Mazz)的根(批次:云南昆明20170801).大麻藥粉碎，過4號篩，粉末備用.大麻藥苷B對照品(實(shí)驗(yàn)室自制，純度≥98.0%);無水乙醇、分析純乙酸、高氯酸、乙酸乙酯均購自國藥集團(tuán);香草醛(AR，aladdin，批號:43885)

　　2方法與結(jié)果

　　2.1總皂苷含量測定方法學(xué)

　　2.1.1對照品溶液的制備

　　大麻藥苷B對照品5.5mg放于5mL容量瓶，甲醇定容，超聲溶解，放冷，補(bǔ)足重量.配制成1.1mg/mL的對照品溶液.

　　2.1.2供試品溶液的制備

　　大麻藥藥材粉末50.0g，加10倍量90%乙醇，浸漬1h，88℃下乙醇回流提取2次，每次2h，將濾渣及濾器洗滌，合并提取液，定容至1000mL.

　　2.1.3測定波長的選擇

　　取對照品溶液分別置15mL具塞試管中，揮干，放冷，加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，搖勻，在70℃水浴中加熱15min，立即置冰浴中冷卻5min，取出，加入乙酸乙酯適量，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白對照，在400～700nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，最終確定在562nm處有最大吸收.

　　2.1.4線性關(guān)系考察

　　分別取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL，按2.1.3方法在562nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.結(jié)果表明，質(zhì)量濃度在13.75～68.75mg/L范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好.回歸直線方程為A=19.964C-0.0595，相關(guān)系數(shù)(R2)為0.9989.

　　2.1.5精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性考察

　　取對照品溶液0.2mL，按2.1.3方法測定吸光度，連續(xù)測定6次，以吸光度(A)計(jì)算，結(jié)果表明，RSD為0.這表明儀器精密度良好.取同一供試品溶液0.05mL，置15mL具塞試管，分別于制備后0、15、30、45、60、90、120min按2.1.3方法測定吸光度，結(jié)果顯示RSD為0.62%，表明該方法在2h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

　　2.2藥材中總皂苷含量測定

　　2.2.1供試品溶液的制備

　　大麻藥粉末3份，每份2.0g，分別至150mL具塞錐形瓶中，加70%乙醇50mL，超聲處理(25℃，功率200W，頻率42Hz)45min，過濾，濾液置100mL容量瓶中，用適量70%乙醇分次洗滌濾器和濾渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻.

　　2.2.2供試品溶液含量測定

　　取0.05mL供試品溶液，按2.1.3方法測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總皂苷含量.取10mL供試品溶液，用差減法測定超聲提取物含量.結(jié)果測得大麻藥總皂苷得率為12.31%，純度為79.54%.

　　2.3大麻藥總皂苷提取單因素考察

　　2.3.1乙醇濃度的影響

　　稱取大麻藥粉末50.0g，分別加入濃度為70%、80%、85%、90%、95%的8倍量乙醇(以藥材質(zhì)量計(jì))，浸漬1h，88℃下回流提取2h，連續(xù)2次，合并濾液.取0.03mL于15mL具刻度試管，揮干，按2.1方法測定，計(jì)算大麻藥總皂苷提取率和純度.分析可知70%、80%乙醇濃度下大麻藥總皂苷提取率較高，但70%、80%乙醇提取下所得提取物濃縮困難，難以形成浸膏，對后續(xù)除雜、干燥產(chǎn)生較大影響，不利于工業(yè)生產(chǎn)。對比90%和95%乙醇提取率和純度，將提取率和純度兩個考察指標(biāo)各賦50%，得到90%乙醇濃度下為71.11%，95%為70.52%.故選擇產(chǎn)品便于處理且提取率和純度相對較高的90%乙醇濃度.

　　2.4正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析

　　2.4.1正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

　　在單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上以大麻藥總皂苷提取率和純度為評價指標(biāo)設(shè)計(jì)L9(34)正交表，對乙醇濃度(A)、料液比(B)、提取時間(C)、提取次數(shù)(D)進(jìn)行考察，并下設(shè)3個較優(yōu)水平.

　　2.4.2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

　　提取次數(shù)對大麻藥總皂苷提取得率影響較大，4個因素影響順序?yàn)樘崛〈螖?shù)>乙醇濃度>料液比>提取時間，以提取率為考察指標(biāo)最佳工藝為90%乙醇、料液比1∶10、提取時間2h、提取次數(shù)2次.以大麻藥提取的總皂苷純度為評價指標(biāo)，4個因素對其影響順序?yàn)橐掖紳舛?gt;提取次數(shù)>提取時間>料液比，最佳工藝為95%乙醇、料液比1∶10、提取時間2h、提取次數(shù)2次.

　　將提取率和提取純度兩個考察指標(biāo)綜合考慮，各賦50%，得出90%乙醇濃度下評價值為76.905%，95%乙醇濃度下為76.685%，綜上結(jié)果最終確立大麻藥總皂苷提取的最佳工藝為90%乙醇、料液比1∶10、提取時間2h、提取次數(shù)2次.從方差結(jié)果分析，提取次數(shù)的改變對總皂苷提取率影響較大，其他因素水平的改變對實(shí)驗(yàn)結(jié)果也有一定影響.相對提取純度，則乙醇濃度的改變對結(jié)果影響較大.綜合考慮極差分析和方差分析，優(yōu)選出大麻藥總皂苷提取工藝為90%乙醇、料液比1∶10、提取時間2h、提取次數(shù)2次.

　　3結(jié)語

　　通過以上單因素考察和正交優(yōu)化，基本確立了大麻藥總皂苷提取的最佳工藝為90%乙醇濃度、料液比1∶10、提取時間2h、提取次數(shù)2次.該工藝重復(fù)性和穩(wěn)定性好，所得提取率及純度較高，總皂苷提取率高達(dá)80%左右，提取純度達(dá)70%以上.后續(xù)將在此工藝的基礎(chǔ)上繼續(xù)開展中試放大研究，從而對該工藝的工業(yè)化生產(chǎn)的可行性進(jìn)行驗(yàn)證，以期達(dá)到操作簡單、成本低廉、條件穩(wěn)定、產(chǎn)率及純度較高的預(yù)期.

　　參考文獻(xiàn)

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