摘要目的:研究傘形科柴胡屬植物柴胡BupleurumchinenseDC.地上部分的化學成分。方法:以70%乙醇提取柴胡地上部分,并依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取,利用硅膠、ODS、SephadexLH-20等柱色譜及制備型HPLC對乙酸乙酯層和正丁醇層進行分離純化,運用HR-ESI-MS和NMR等多種波譜技術鑒定化合物結構。結果:從柴胡地上部分乙酸乙酯部位和正丁醇部位中共分離得到了17個化合物,分別鑒定為:丁香酸(1)、香草酸(2)、原兒茶酸(3)、(6R,9S)-3-oxo-α-ionol-β-D-glucopyranoside(4)、blumenolCglucoside(5)、(9S)-drummondol-9-Oβ-D-glucopyranoside(6)、(6S,9S)-玫瑰花苷(7)、淫羊藿次苷B5(8)、(-)-當歸棱子芹醇-2-O-β-D-呋喃芹菜糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、鈍雞蛋花素(10)、hyptaticacidB(11)、壬二酸(12)、japonicaacid(13)、二十八烷醇(14)、(9E)-8,11,12-trihydroxyoctadecenoicacidmethylester(15)、(R,Z)-hex-2-ene-1,5-diol(16)、13-carboxyblumenolC(17)。結論:其中,化合物4、5、7、10~17為首次從傘形科植物中分離得到,化合物1、6、8、9為首次從柴胡屬植物中分離得到。

　　關鍵詞柴胡;傘形科;地上部分;化學成分

　　柴胡為傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狹葉柴胡BupleurumscorzonerifoliumWild.的干燥根〔1〕,兩者分別習稱北柴胡和南柴胡。主要分布于我國東北、華北、西北、華東和華中各地。李時珍《本草綱目》中關于柴胡的記載為“治陽氣下陷,平肝膽三焦包絡相火,及頭痛眩運,目昏赤痛障翳,耳聾鳴,諸瘧,及肥氣寒熱,婦人熱入血室,經水不調,小兒痘疹余熱,五疳羸熱”,作為中醫藥學的典范,在當時較為全面地論述了柴胡的功效〔2〕。北柴胡的傳統藥用部位為地下的根,其藥材市場需求量巨大,野生資源又供不應求,然而占柴胡整個植物干重的70%~85%的地上部分被當成廢料大量丟棄〔3〕,資源浪費非常嚴重。通過文獻查閱可知,北柴胡地上部分的現代藥理學研究主要圍繞解熱鎮痛、鎮靜抗炎、保肝利膽〔4〕等活性開展,而其化學成分的相關報道較少。

　　中藥資源論文范例： 中藥中農藥多殘留分析技術的研究進展

　　為了中藥資源的高效利用,推進可持續發展戰略,進一步闡明其地上部分的藥效物質基礎,本課題組對北柴胡地上部分乙酸乙酯層和正丁醇層化學成分進行研究,通過1D-NMR及2D-NMR波譜學手段,結合HR-ESI-MS質譜數據,分離鑒定出17個化合物,分別為:丁香酸(1)、香草酸(2)、原兒茶酸(3)、(6R,9S)-3-oxo-α-ionol-β-D-glucopyranoside(4)、blumenolCglucoside(5)、(9S)-drummondol-9-O-β-D-glucopyranoside(6)、(6S,9S)-玫瑰花苷(7)、淫羊藿次苷B5(8)、(-)-當歸棱子芹醇-2-O-βD-呋喃芹菜糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、鈍雞蛋花素(10)、hyptaticacidB(11)、壬二酸(12)、japonicaacid(13)、二十八烷醇(14)、(9E)-8,11,12-trihydroxyoctadecenoicacidmethylester(15)、(R,Z)-hex-2-ene-1,5-diol(16)、13-carbox-yblumenolC(17)。其中,化合物4、5、7、10~17為首次從傘形科植物中分離得到,化合物1、6、8、9為首次從柴胡屬植物中分離得到。

　　1儀器與材料

　　AV-600型超導核磁共振儀(德國Bruker公司);Q-TOF(ESI)高分辨質譜儀(Waters公司);中壓制備(布奇公司);515-2414型制備型高效液相色譜(島津公司);e2695-2998-2424型分析型高效液相色譜(美國Waters公司);SephadexLH-20葡聚糖凝膠(GEHealthcare公司);反相ODS(YMC公司);柱色譜硅膠(200~300目)和薄層色譜硅膠(青島海洋化工廠);色譜甲醇(默克公司);β-谷甾醇和豆甾醇對照品(批號分別為:112567-2D1909、112543-201909,維克奇生物科技公司)。實驗用柴胡地上部分于2017年9月采自黑龍江省大慶市林甸地區。經黑龍江中醫藥大學藥用植物學教研室樊銳鋒副教授鑒定為傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.的干燥地上部分,標本(NO.20170910)保存于黑龍江中醫藥大學中藥化學教研室。

　　2提取與分離

　　將干燥的柴胡地上部分(44.4kg)碎斷成2cm左右的小段,用8倍量70%乙醇溶液加熱回流提取3次,每次1h,過濾,合并濾液,減壓回收溶劑后得到綠棕色浸膏(5.6kg)。浸膏在蒸餾水(8.0L)中溶解分散,再分別使用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇(水飽和)進行萃取,回收溶劑后得到石油醚萃取部位(288g)、乙酸乙酯萃取部位(741g)、正丁醇萃取部位(607g)。分別取乙酸乙酯萃取部位400g和正丁醇萃取部位300g經正相硅膠柱色譜分離,以二氯甲烷-甲醇為洗脫劑進行梯度洗脫,經多次TLC檢識合并相同組分,最終乙酸乙酯層得到10個流分Fr.Ⅰ~Ⅹ;正丁醇層得到11個流分Fr.A~K。Fr.Ⅰ經正相硅膠柱色譜分離,得到Fr.Ⅰ-A~Ⅰ-C,其中Fr.Ⅰ-A經SephadexLH-20凝膠柱分離得化合物。14(31.3mg)。

　　Fr.Ⅱ經ODS反相柱色譜分離,得5個組分Fr.Ⅱ-A~Ⅱ-E,其中Fr.Ⅱ-B經SephadexLH-20凝膠柱分離得化合物10(20.8mg),Fr.Ⅱ-B經SephadexLH-20凝膠柱和制備型HPLC分離得化合物2(50.3mg);Fr.Ⅱ-C經SephadexLH-20凝膠柱分離得化合物1(37.5mg);Fr.Ⅱ-D經SephadexLH-20凝膠柱分離得化合物13(4.0mg);Fr.Ⅱ-E經SephadexLH-20凝膠柱分離得到化合物12(97.1mg)。Fr.Ⅲ經ODS反相柱色譜分離,得6個組分Fr.Ⅲ-A~Ⅲ-F,其中Fr.Ⅲ-C經SephadexLH-20凝膠柱和制備型HPLC分離得化合物17(3.0mg)。

　　Fr.Ⅳ經ODS反相柱色譜分離,得4個組分Fr.Ⅳ-A~Ⅳ-D,其中Fr.Ⅳ-B經SephadexLH-20凝膠柱分離得化合物15(4.5mg)、16(2.0mg);Fr.Ⅳ-C經SephadexLH-20凝膠柱分離得化合物3(14.0mg)、11(5.2mg)。Fr.C經ODS反相柱色譜分離,得6個組分Fr.C-1~C-6,其中Fr.C-3經SephadexLH-20凝膠柱和制備型HPLC分離得化合物4(12.5mg)、5(7.4mg)。

　　Fr.D經ODS反相柱色譜分離,得5個組分Fr.D-1~D-5,其中Fr.D-2經SephadexLH-20凝膠柱和制備型HPLC分離得化合物6(15.6mg)、7(13.2mg)、8(8.9mg)。Fr.G經ODS反相柱色譜分離,得3個組分Fr.G-1~G-3,其中Fr.G-3經SephadexLH-20凝膠柱和制備型HPLC分離得化合物9(5.8mg)。3結構鑒定化合物1:白色針晶。HR-ESI-MSm/z:199.0603[M+H]+;分子式為C9H10O5。1H-NMR(CD3OD,400MHz)δ:7.32(2H,s,H-2,6),3.87(6H,s,3,5-OCH3);13C-NMR(CD3OD,100MHz)δ:141.7(C-1),148.8(C-2,6),108.3(C-3,5),121.9(C-4),56.8(3,5-OCH3),170.0(1-COOH)。上述數據與文獻〔5〕報道對照基本一致,故鑒定化合物1為丁香酸。化合物2:白色粉末。HR-ESI-MSm/z:169.0492[M+H]+;分子式為C8H8O4。

　　1H-NMR(CD3OD,400MHz)δ:7.56(1H,d,J=1.9Hz,H-2),7.54(1H,dd,J=8.8,1.9Hz,H-6),6.83(1H,d,J=8.8Hz,H-5),3.88(3H,s,3-OCH3);13C-NMR(CD3OD,100MHz)δ:123.1(C-1),113.8(C-2),152.7(C-3),148.7(C-4),115.8(C-5),125.3(C-6),56.4(3-OCH3),170.0(1-COOH)。上述數據與文獻〔6〕報道對照基本一致,故鑒定化合物2為香草酸。化合物3:白色粉末。HR-ESI-MSm/z:155.0337[M+H]+;分子式為C7H6O4。1H-NMR(CD3OD,600MHz)δ:7.43(1H,d,J=1.9Hz,H-2),7.41(1H,dd,J=8.1,1.9Hz,H-6),6.79(1H,d,J=8.1Hz,H-5);13C-NMR(CD3OD,150MHz)δ:123.3(C-1),115.7(C-2),146.0(C-3),151.5(C-4),117.7(C-5),123.8(C-6),170.3(1-COOH)。上述數據與文獻〔6〕報道對照基本一致,故鑒定化合物3為原兒茶酸。

　　化合物4:白色無定型粉末。HR-ESI-MSm/z:371.2070[M+H]+;分子式為C19H30O7。

　　1H-NMR(CD3OD,600MHz)δ:5.89(1H,s,H-4),5.75(1H,dd,J=15.6,9.4Hz,H-7),5.58(1H,dd,J=15.6,7.5Hz,H-8),4.48(1H,m,H-9),4.28(1H,d,J=7.8Hz,H-1′),3.84(1H,dd,J=11.9,2.2Hz,H6′),3.63(1H,dd,J=11.9,6.2Hz,H-6′)3.13~3.28(4H,o,H-2′,3′,4′,5′),2.69(1H,d,J=9.4Hz,H-6),2.47(1H,d,J=16.7Hz,H-2),2.05(1H,d,J=16.7Hz,H-2),1.98(3H,d,J=1.0Hz,H-13),1.29(3H,d,J=6.4Hz,H-10),1.03(3H,s,H-12),0.98(3H,s,H-11);13C-NMR(CD3OD,150MHz)δ:37.2(C-1),48.5(C-2),202.2(C-3),126.2(C-4),165.6(C-5),56.9(C-6),131.2(C-7),137.0(C-8),74.8(C-9),22.2(C-10),27.4(C-11),28.0(C-12),23.9(C-13),101.2(C-1′),74.9(C-2′),78.4(C3′),71.7(C-4′),78.2(C-5′),62.8(C-6′)。上述數據與文獻〔7〕報道對照基本一致,故鑒定化合物4為(6R,9S)-3-oxo-α-ionol-β-D-glucopyranoside。化合物5:白色固體。HR-ESI-MSm/z:373.2226[M+H]+;分子式為C19H32O7。

　　1H-NMR(CD3OD,600MHz)δ:5.80(1H,s,H-4),4.32(1H,d,J=7.8Hz,H-1′),3.85(1H,dd,J=11.9,2.2Hz,H-6′),3.82(1H,o,H-9),3.65(1H,dd,J=11.9,5.3Hz,H-6′),3.24~3.34(1H,o,H-3′),3.14(1H,dd,J=7.8,1.1,H-2′),3.13~3.28(2H,o,H-4′,5′),2.48(1H,d,J=17.4Hz,H-2),2.04(3H,d,J=1.1Hz,H-13),1.98(1H,d,J=17.4Hz,H-2),1.97(1H,o,H-6),1.80(1H,o,H-7),1.60~1.71(3H,o,H-7,8),1.25(3H,d,J=6.2Hz,H-10),1.09(3H,s,H-12),1.01(3H,s,H-11);13C-NMR(CD3OD,150MHz)δ:37.4(C-1),48.1(C-2),202.4(C-3),125.4(C-4),169.9(C-5),52.6(C-6),26.6(C-7),37.4(C-8),77.6(C-9),21.9(C-10),29.0(C-11),27.5(C-12),25.0(C-13),104.0(C-1′),75.3(C-2′),78.2(C-3′),71.7(C-4′),77.8(C-5′),62.8(C-6′)。上述數據與文獻〔8〕報道對照基本一致,故鑒定化合物5為blumenolCglucoside。 化合物6:白色無定型粉末。HR-ESI-MSm/z:403.1968[M+H]+;分子式為C19H30O9。

　　1H-NMR(CD3OD,600MHz)δ:6.29(1H,brd,J=15.4Hz,H7),6.02(1H,dd,J=15.4,6.6Hz,H-8),4.58(1H,m,H-9),4.30(1H,d,J=7.7Hz,H-1′),3.92(1H,dd,J=7.7,2.8Hz,H-11),3.86(1H,dd,J=11.9,1.8Hz,H-6′),3.64(1H,brd,J=7.7Hz,H-11),3.62(1H,dd,J=11.8,6.4Hz,H-6′),3.16~3.30(4H,o,H-2′,3′,4′,5′),2.84(1H,brd,J=17.9Hz,H-4),2.72(1H,dd,J=17.9,2.3Hz,H-2),2.69(1H,d,J=9.4Hz,H-6),2.44(1H,dd,J=17.9,2.5Hz,H-4),2.31(1H,dd,J=17.9,2.3HzH-2),1.32(3H,d,J=6.5Hz,H-10),1.20(3H,d,J=1.0Hz,H-13),0.96(3H,s,H-12);13C-NMR(CD3OD,150MHz)δ:48.8(C-1),53.2(C-2),211.3(C-3),54.0(C-4),87.6(C-5),82.6(C-6),129.2(C-7),137.2(C-8),74.5(C-9),22.5(C-10),78.4(C-11),15.6(C-12),19.5(C-13),101.2(C-1′),75.0(C-2′),78.2(C-3′),71.7(C-4′),78.3(C-5′),62.9(C-6′)。上述數據與文獻〔9〕報道對照基本一致,故鑒定化合物6為(9S)-drummondol-9-O-β-D-glucopyranoside。

　　化合物17:白色粉末。HR-ESI-MSm/z:503.2610[2M+Na]+;分子式為C13H20O4。1H-NMR(CD3OD,600MHz)δ:6.56(1H,s,H-4),3.68(1H,m,H-9),2.64(1H,t,J=5.0Hz,H-6),2.61(1H,d,J=17.9Hz,H-2a),2.10(1H,d,J=17.9Hz,H-2b),1.84(1H,m,H-7a),1.53(1H,m,H-8a),1.45(1H,m,H-8b),1.38(1H,m,H-7b),1.14(3H,s,H-12),1.12(3H,d,J=6.2Hz,H-10),1.01(3H,s,H11);13C-NMR(CD3OD,150MHz)δ:37.3(C-1),48.0(C-2),203.3(C-3),131.3(C-4),155.1(C-5),46.0(C-6),28.7(C-7),38.7(C-8),68.6(C-9),23.4(C-10),27.8(C-11),28.7(C-12),169.2(C13)。上述數據與文獻〔20〕報道對照基本一致,故鑒定化合物17為13-carboxyblumenolC。

　　參考文獻

　　[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京:中國醫藥科技出版社,2020:293.

　　[2]翟昌明,王雪茜,程發峰,等.柴胡功效的歷史演變與入藥品種及藥用部位的相互關系[J].世界中醫藥,2016,11(5):906-909.

　　作者：劉艷,張振朋,肖宗雨,黃金,匡海學,楊炳友∗