摘要目的:利用正交設計優選出大麻藥總皂苷提取工藝.方法:在單因素實驗結果的基礎上，以大麻藥總皂苷提取率和純度為考察指標，設計L9(34)正交實驗，考察乙醇濃度、料液比、提取時間和提取次數對大麻藥總皂苷提取的影響.結果:大麻藥總皂苷提取的最佳工藝為乙醇濃度90%，料液比1∶10，提取時間2h，提取次數2次.結論:該工藝穩定，所得總皂苷提取率及純度較高，可為大麻藥總皂苷的工業化生產提供科學依據.

　　關鍵詞正交設計;大麻藥;總皂苷;提取工藝;單因素

　　大麻藥(RadixDolichosae)為豆科植物鐮扁豆(DolichosappendiculatusHand.-Mazz)的干燥根.鐮扁豆別名麻三段、大九莢、鐮葉山扁豆等，主要分布于云南、四川、甘肅、廣東等地，尤以云南為多.本品性辛、麻、溫，有小毒[1，2]，歸肺、心經.具有“通氣活絡，活血止血，消腫止痛，接骨生肌”的功效[3].現代研究還發現大麻藥具有利尿、抗痛風、抗腫瘤、抗癌等功效[4-7]，其主要化學成分為三萜皂苷、生物堿、黃酮等[8-13].痛風是嘌呤代謝紊亂引起的一種代謝性疾病。近年來，隨著生活習性與飲食結構的改變，痛風的發病率呈逐年上升和年輕化趨勢.目前痛風的治療還局限于緩解急性期的疼痛，和降低血尿酸濃度.而臨床所用一線藥多具不良反應[14]，前期研究發現大麻藥總皂苷在抗痛風和治療心血管系統等疾病方面發揮重要功效，且含量較高.本實驗旨在探究大麻藥總皂苷提取的最佳工藝[15，16]，為工業化生產提供科學依據.

　　1儀器與材料

　　旋轉蒸發器、恒溫水浴鍋(上海亞榮);循環水式多用真空泵(上海貝茵);DHG-9030A鼓風干燥箱(上海一恒);UPH-I-10T實驗室超純水制造系統(成都優普);電子天平(奧豪斯儀器);紫外分光光度計(UV-1800PC，Mapada).大麻藥經中南民族大學藥學院陳旅翼副教授鑒定為豆科植物鐮扁豆(DolichosappendiculatusHand.-Mazz)的根(批次:云南昆明20170801).大麻藥粉碎，過4號篩，粉末備用.大麻藥苷B對照品(實驗室自制，純度≥98.0%);無水乙醇、分析純乙酸、高氯酸、乙酸乙酯均購自國藥集團;香草醛(AR，aladdin，批號:43885)

　　2方法與結果

　　2.1總皂苷含量測定方法學

　　2.1.1對照品溶液的制備

　　大麻藥苷B對照品5.5mg放于5mL容量瓶，甲醇定容，超聲溶解，放冷，補足重量.配制成1.1mg/mL的對照品溶液.

　　2.1.2供試品溶液的制備

　　大麻藥藥材粉末50.0g，加10倍量90%乙醇，浸漬1h，88℃下乙醇回流提取2次，每次2h，將濾渣及濾器洗滌，合并提取液，定容至1000mL.

　　2.1.3測定波長的選擇

　　取對照品溶液分別置15mL具塞試管中，揮干，放冷，加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，搖勻，在70℃水浴中加熱15min，立即置冰浴中冷卻5min，取出，加入乙酸乙酯適量，搖勻，以相應試劑為空白對照，在400～700nm波長范圍內進行掃描，最終確定在562nm處有最大吸收.

　　2.1.4線性關系考察

　　分別取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL，按2.1.3方法在562nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標、濃度為橫坐標繪制標準曲線.結果表明，質量濃度在13.75～68.75mg/L范圍內，線性關系良好.回歸直線方程為A=19.964C-0.0595，相關系數(R2)為0.9989.

　　2.1.5精密度、穩定性及重復性考察

　　取對照品溶液0.2mL，按2.1.3方法測定吸光度，連續測定6次，以吸光度(A)計算，結果表明，RSD為0.這表明儀器精密度良好.取同一供試品溶液0.05mL，置15mL具塞試管，分別于制備后0、15、30、45、60、90、120min按2.1.3方法測定吸光度，結果顯示RSD為0.62%，表明該方法在2h內穩定性良好.

　　2.2藥材中總皂苷含量測定

　　2.2.1供試品溶液的制備

　　大麻藥粉末3份，每份2.0g，分別至150mL具塞錐形瓶中，加70%乙醇50mL，超聲處理(25℃，功率200W，頻率42Hz)45min，過濾，濾液置100mL容量瓶中，用適量70%乙醇分次洗滌濾器和濾渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻.

　　2.2.2供試品溶液含量測定

　　取0.05mL供試品溶液，按2.1.3方法測定吸光度，根據標準曲線計算總皂苷含量.取10mL供試品溶液，用差減法測定超聲提取物含量.結果測得大麻藥總皂苷得率為12.31%，純度為79.54%.

　　2.3大麻藥總皂苷提取單因素考察

　　2.3.1乙醇濃度的影響

　　稱取大麻藥粉末50.0g，分別加入濃度為70%、80%、85%、90%、95%的8倍量乙醇(以藥材質量計)，浸漬1h，88℃下回流提取2h，連續2次，合并濾液.取0.03mL于15mL具刻度試管，揮干，按2.1方法測定，計算大麻藥總皂苷提取率和純度.分析可知70%、80%乙醇濃度下大麻藥總皂苷提取率較高，但70%、80%乙醇提取下所得提取物濃縮困難，難以形成浸膏，對后續除雜、干燥產生較大影響，不利于工業生產。對比90%和95%乙醇提取率和純度，將提取率和純度兩個考察指標各賦50%，得到90%乙醇濃度下為71.11%，95%為70.52%.故選擇產品便于處理且提取率和純度相對較高的90%乙醇濃度.

　　2.4正交實驗設計及結果分析

　　2.4.1正交實驗設計

　　在單因素實驗結果的基礎上以大麻藥總皂苷提取率和純度為評價指標設計L9(34)正交表，對乙醇濃度(A)、料液比(B)、提取時間(C)、提取次數(D)進行考察，并下設3個較優水平.

　　2.4.2正交實驗結果及分析

　　提取次數對大麻藥總皂苷提取得率影響較大，4個因素影響順序為提取次數>乙醇濃度>料液比>提取時間，以提取率為考察指標最佳工藝為90%乙醇、料液比1∶10、提取時間2h、提取次數2次.以大麻藥提取的總皂苷純度為評價指標，4個因素對其影響順序為乙醇濃度>提取次數>提取時間>料液比，最佳工藝為95%乙醇、料液比1∶10、提取時間2h、提取次數2次.

　　將提取率和提取純度兩個考察指標綜合考慮，各賦50%，得出90%乙醇濃度下評價值為76.905%，95%乙醇濃度下為76.685%，綜上結果最終確立大麻藥總皂苷提取的最佳工藝為90%乙醇、料液比1∶10、提取時間2h、提取次數2次.從方差結果分析，提取次數的改變對總皂苷提取率影響較大，其他因素水平的改變對實驗結果也有一定影響.相對提取純度，則乙醇濃度的改變對結果影響較大.綜合考慮極差分析和方差分析，優選出大麻藥總皂苷提取工藝為90%乙醇、料液比1∶10、提取時間2h、提取次數2次.

　　3結語

　　通過以上單因素考察和正交優化，基本確立了大麻藥總皂苷提取的最佳工藝為90%乙醇濃度、料液比1∶10、提取時間2h、提取次數2次.該工藝重復性和穩定性好，所得提取率及純度較高，總皂苷提取率高達80%左右，提取純度達70%以上.后續將在此工藝的基礎上繼續開展中試放大研究，從而對該工藝的工業化生產的可行性進行驗證，以期達到操作簡單、成本低廉、條件穩定、產率及純度較高的預期.

　　參考文獻

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　　[2]LANZ，HUC，HUANGY，etal.SafetyassessmentofsaponinsextractinDolichosfalcatusKlein:SubchronicstudyinSprague-Dawleyrats[J].JournalofEthnopharmacology，2015，174:230-237.

　　[3]余洪才.外敷中草藥“大麻藥散”治療閉合性骨折和軟組織損傷86例[J].中華實用中西醫雜志，2001，14(12):2583-2583.

　　[4]WEIH，HUC，XIEJ，etal.DolirosideAattenuatesmonosodiumuratecrystals-inducedinflammationbytargetingNLRP3inflammasome[J].EuropeanJournalofPharmacology，2014(740):321-328.

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