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　　【摘要】 目的篩選蕁麻抗風(fēng)濕活性部位，為蕁麻的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。方法萃取法制備不同極性的溶劑部位(石油醚部位、乙醚部位、醋酸乙酯部位、水溶性部位)，小鼠急性耳廓腫法、棉球肉芽腫法篩選抗炎活性部位;小鼠熱板法、醋酸扭體法篩選鎮(zhèn)痛活性部位。結(jié)果醋酸乙酯部位具有顯明的抗炎和鎮(zhèn)痛活性，能明顯抑制二甲苯所致小鼠急性耳廓腫、小鼠棉球肉芽腫及熱板、冰醋酸所致小鼠疼痛。結(jié)論 醋酸乙酯部位為蕁麻抗風(fēng)濕活性部位，值得進(jìn)一步研究。

　　【關(guān)鍵詞】 蕁麻 風(fēng)濕 活性部位

　　蕁麻Urtica Fissa E.pritz.在我國(guó)被廣泛用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等病的治療，療效確切[1]，但作用物質(zhì)基礎(chǔ)研究未見報(bào)道;同時(shí)蕁麻藥材也缺乏質(zhì)量控制指標(biāo)，因此尋找蕁麻活性成分具有十分重要的意義。為研究蕁麻抗風(fēng)濕的活性成分，并為蕁麻的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)，筆者對(duì)蕁麻抗風(fēng)濕的活性部位進(jìn)行了藥理篩選。現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

　　1 器材

　　1.1 材料與試劑

　　作者采于四川省成都溫江縣通平鎮(zhèn)，經(jīng)作者鑒定為蕁麻Urtica fissa E.Pritz，全草曬干備用。乙醇為化學(xué)純，其余化學(xué)試劑均為分析純。

　　1.2 動(dòng)物昆明種小鼠(清潔級(jí))，體重(20±2)g，由復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)：(滬)SCSK2002��0026)。

　　1.3 儀器與軟件R502B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司)，AB104�睸電子天平(深圳君達(dá)時(shí)代儀器有限公司)。統(tǒng)計(jì)軟件：PEMS 3.0。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 受試組分的制備蕁麻干燥全草8 kg，粉碎成粗粉，95%工業(yè)乙醇150 L分3次回流提取，提取液合并，回收部分乙醇，室溫放置24 h，析出大量硝酸鉀結(jié)晶，濾去結(jié)晶，繼續(xù)回收乙醇至干得醇浸膏(A)685 g。將醇浸膏懸浮于水，用石油醚(30～60℃)萃取3次，2 500 ml/次，減壓收盡溶劑得石油醚浸膏(B)306 g;乙醚萃取3次，2 500 ml/次，減壓收盡溶劑得乙醚浸膏(C)22 g。繼用醋酸乙酯萃取3次，3 000 ml/次，減壓收盡溶劑得醋酸乙酯浸膏(D)95 g，母液減壓收盡溶劑得浸膏(E)242 g。各組分均用0.5%CMC溶液超聲溶解，分別配成50 mg·ml-1的溶液備用。

　　2.2 各組分的抗炎作用比較

　　2.2.1 小鼠急性耳廓腫取雄性小鼠60只，隨機(jī)分6組，每組10只。按表1劑量腹腔注射給藥，給藥30 min后，用二甲苯0.1 ml均勻涂布于各鼠右耳的正反面，再過30 min后處死，用8 mm打孔器在兩耳同一部位扎下左右耳片，精密稱重，以右耳的重量減去左耳的重量作為耳廓炎性腫脹度，計(jì)算右耳腫脹度及抑制率[2]。結(jié)果見表1。可以看出，A，D，E組有顯著的抗炎活性，明顯抑制二甲苯所致的小鼠急性耳廓腫，其中D的作用最強(qiáng)。而B，C組均無(wú)明顯抗炎活性。表1 蕁麻各組分對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響(略)

　　2.2.2 棉球肉芽腫雄性小鼠，在乙醚淺麻醉下腹部去毛消毒。腹部切口，將兩個(gè)已高壓滅菌的5 mg棉球分別植入小鼠兩側(cè)腋窩皮下，縫合皮膚后消毒。隨機(jī)分組，手術(shù)當(dāng)天按表2劑量給藥，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后處死小鼠，取出棉球，在70℃烘箱中干燥2 h后稱重，減去原棉球重量即為肉芽腫重量[3]。結(jié)果表明，A，D，E組能明顯抑制小鼠棉球肉芽腫，D的作用最顯著，能顯著抑制肉芽組織的增生。結(jié)果見表2。表2 蕁麻各組分對(duì)棉球肉芽腫重量的影響(略)

　　2.3 各組分的鎮(zhèn)痛作用比較

　　2.3.1 醋酸扭體法將60只小鼠(雌雄各半)，隨機(jī)分為6組，每組10只，稱重并編號(hào)。陰性對(duì)照組腹腔注射0.2 ml/20 g(體重)生理鹽水，按表3劑量給藥。在給藥60 min后腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 ml/只。觀察并記錄注射醋酸溶液后15 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)。實(shí)驗(yàn)完畢，計(jì)算藥物鎮(zhèn)痛百分率[4]，結(jié)果見表3。可見，A，D，E組均有明顯的鎮(zhèn)痛作用，能明顯減少冰醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)，其中D組作用最強(qiáng);A，D組還能明顯延緩小鼠扭體的出現(xiàn)。表3 蕁麻各組分對(duì)醋酸所致小鼠疼痛的影響(略)

　　2.3.2 熱板法選擇對(duì)55℃熱板痛覺反應(yīng)在10～30 s者60只雄性小鼠，隨機(jī)分為6組，每組10只。每只小鼠給藥前及給藥(按表4給予藥物及劑量)后30，60，90，120 min測(cè)定痛反應(yīng)潛伏期，計(jì)算痛閾提高率[4]。結(jié)果見表4。結(jié)果證明A，D，E組有明顯的鎮(zhèn)痛作用，以D組的作用最強(qiáng)。B，C組無(wú)明顯活性。表4 蕁麻各組分對(duì)鼠熱板致痛反應(yīng)的影響(略)

　　3 討論

　　蕁麻在我國(guó)用于治療風(fēng)濕、類風(fēng)濕療效確切，歷史悠久，但對(duì)其作用物質(zhì)基礎(chǔ)研究目前尚屬空白。本文在前期研究基礎(chǔ)上，首次對(duì)蕁麻的活性部位進(jìn)行了追蹤，確定了其抗風(fēng)濕活性部位。研究證明該活性部位具有明顯的抗炎活性，能明顯抑制二甲苯致小鼠急性耳廓腫以及小鼠棉球肉芽腫，提示該活性部位不僅對(duì)早期滲出炎癥有抑制作用，同時(shí)對(duì)炎癥后期的慢性結(jié)締組織增生也有較強(qiáng)的抑制作用;此外該部位還具有明顯的鎮(zhèn)痛活性，能明顯抑制熱板、冰醋酸所致小鼠疼痛，表明該活性部位不僅對(duì)炎性疼痛具有抑制作用，同時(shí)對(duì)其他誘因引起的疼痛也有一定的抑制作用。證明該活性部位有利于風(fēng)濕、類風(fēng)濕炎癥及疼痛的緩解，為蕁麻抗風(fēng)濕的活性部位。

　　此外，我們還對(duì)蕁麻抗風(fēng)濕活性部位的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從中分離并鑒定了山柰酚��3�睴��β�睤�策拎�葡萄糖苷、咖啡酸、綠原酸、東茛菪苷、東茛菪內(nèi)酯、山柰酚��3�睴�彩|香糖苷、槲皮素��7�睴��β�睤�策拎�葡萄糖苷、異鼠李素��3�睴�彩|香糖苷等多個(gè)黃酮類及酚酸類成分[5]，其中東茛菪苷、東茛菪內(nèi)酯已被證實(shí)具有明顯鎮(zhèn)痛活性，槲皮素、咖啡酸、綠原酸等具有明顯的抗炎作用和免疫調(diào)節(jié)作用。這進(jìn)一步提示醋酸乙酯部位為蕁麻治療風(fēng)濕的活性部位，黃酮及酚酸類成分為蕁麻抗風(fēng)濕的活性成分。對(duì)該部位進(jìn)行深入研究具有重要意義，可為蕁麻的質(zhì)量控制及抗風(fēng)濕的作用機(jī)理研究提供科學(xué)依據(jù)。

　　本研究采用萃取方法分離制備活性部位，其抗炎、鎮(zhèn)痛作用明顯優(yōu)于其他部位且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明采用萃取方法分離蕁麻抗風(fēng)濕活性部位的方法不僅簡(jiǎn)便，而且可行。

　　【參考文獻(xiàn)】

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