【摘要】 目的考察白花蛇舌草提取物對(duì)G+和G-的抑菌效果。方法采用打孔法和滴注法測(cè)定了白花蛇舌草95%乙醇提取物對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、鐮刀菌的抑菌作用。結(jié)果20%白花蛇舌草提取物對(duì)綠膿桿菌的抑菌環(huán)直徑為(18.86±0.56) mm，大腸桿菌的為(12.78±0.44) mm;對(duì)4種供試菌的最低抑菌濃度(MIC)分別為2.0%,0.5%,0.25%,0.05%。結(jié)論白花蛇舌草提取物對(duì)革蘭氏陰性菌的抑菌作用較革蘭氏陽(yáng)性菌明顯。

　　【關(guān)鍵詞】 在線征集論文,白花蛇舌草,提取物,抑菌作用

　　白花蛇舌草Oldenlandia diffusa Willd為茜草科耳草屬植物，別名蛇舌草、蛇針草、二葉律、白花十字草、龍舌草、鶴舌草等。其性甘寒、微苦，以全草供藥用，具有清熱解毒、活血化淤、利水滲濕、消腫止痛之功效[1]，有研究報(bào)道白花蛇舌草有抗腫瘤作用和免疫學(xué)活性[2,3]，故臨床應(yīng)用廣泛，主治惡性腫瘤、胃腸炎、闌尾炎、扁桃體炎、肺炎、泌尿系感染等病癥。外用治療毒蛇咬傷、癰腫瘡癤等癥。筆者從白花蛇舌草中提取抑菌物質(zhì)，用幾種常見的微生物進(jìn)行抑菌作用研究，以期為白花蛇舌草的開發(fā)利用找到新的途徑。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 白花蛇舌草購(gòu)自藥材市場(chǎng)。

　　1.1.2 供試菌種金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)和大腸桿菌 (Escherichia coli)由昆明理工大學(xué)生物工程實(shí)驗(yàn)室保存。鐮刀菌(Fusarium sp.)由云南大學(xué)提供。

　　1.1.3 培養(yǎng)基大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌為L(zhǎng)B培養(yǎng)基，鐮刀菌為馬鈴薯培養(yǎng)基。

　　1.2 方法

　　1.2.1 白花蛇舌草提取物的制備取經(jīng)干燥粉碎的白花蛇舌草50 g用索式抽提器抽提，水浴加熱，溫度控制在90℃，用95%的乙醇回流提取36h，將抽提物蒸干，用醋酸乙酯(打孔法用)和二甲基亞砜(滴注法用)溶解， 4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

　　1.2.2 樣品溶液的制備用醋酸乙酯溶解物分別稀釋成20 %，2%，0.2 %，0.02 %，0.002 %濃度，用二甲基亞砜溶解物分別稀釋成4 %，2 %，1 %，0.5 %，0.25 %，0.125%，0.1 %，0.05 %，0.025 %濃度備用。

　　1.2.3 供試菌株懸浮液的制備[4]在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行無菌操作。增菌培養(yǎng)后，用生理鹽水將菌懸液稀釋成含菌量(集落形成單位，cfu)：細(xì)菌為1.0×108，真菌為1.0×106。

　　1.2.4 抑菌效果測(cè)定方法采用打孔法[5]，在直徑為9 cm的平板上傾倒培養(yǎng)基，厚度約6 mm，待冷卻后每個(gè)平板加菌液100 μl，涂布均勻后用無菌鋼管打3個(gè)孔，每孔直徑為4 mm，在每個(gè)孔中先加0.7%瓊?cè)芤?0 μl封底，再加稀釋好的藥物溶液40 μl，對(duì)照孔分別加入含相應(yīng)濃度的醋酸乙酯無菌水溶液，然后置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，真菌培養(yǎng)48 h，細(xì)菌培養(yǎng)24 h。測(cè)量抑菌環(huán)直徑，取平均值。

　　1.2.5 最低抑菌濃度(MIC) 和最低殺菌濃度(MBC)的測(cè)定采用滴注法[6]，將不同濃度的二甲基亞砜樣品溶解液4 ml與36 ml 培養(yǎng)基的在三角瓶中混勻，使培養(yǎng)基中藥物濃度為原來的10-1，倒平板，待凝固后，吸取菌液10 μl滴種在培養(yǎng)基上，每個(gè)平板滴8滴，二甲基亞砜作空白。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。待菌液吸收后，平皿平放培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)，連續(xù)4 d觀察菌落生長(zhǎng)情況。對(duì)于細(xì)菌，以培養(yǎng)24 h不長(zhǎng)菌的濃度為最低抑菌濃度(MIC)，4 d不長(zhǎng)菌的濃度為最低殺菌濃度(MBC);對(duì)于真菌，以培養(yǎng)2 d不長(zhǎng)菌的濃度為最低抑菌濃度(MIC)，4 d不長(zhǎng)菌的濃度為最低殺菌濃度(MBC)。

　　1.3 統(tǒng)計(jì)分析抑菌圈結(jié)果以±s記錄，用student-t檢驗(yàn)兩組數(shù)據(jù)之間的顯著性差異，當(dāng)P<0.05時(shí)，認(rèn)為存在顯著性差異;當(dāng)P<0.01時(shí)，認(rèn)為存在極顯著性差異。

　　2 結(jié)果與討論

　　2.1 白花蛇舌草乙醇提取物的抑菌效果將白花蛇舌草的乙醇提取物用醋酸乙酯溶解，并稀釋成20 %，2 %，0.2 %，0.02 %，0.002 %的濃度，分別加入已涂各菌液平皿的孔中，每一濃度做8個(gè)孔，培養(yǎng)后測(cè)定抑菌圈直徑。結(jié)果見表1。表1 不同濃度白花蛇舌草乙醇提取物的抑菌效果(略)

　　從表1中可以看出，隨著白花蛇舌草提取物濃度的增加，其對(duì)4種供試菌的抑菌效果越明顯，尤其對(duì)綠膿桿菌的抑菌效果較好，大腸桿菌次之，對(duì)金黃色葡萄球菌和鐮刀菌的抑菌效果較差，在白花蛇舌草提取物濃度≤0.2%時(shí)，其對(duì)金黃色葡萄球菌和鐮刀菌的抑菌效果差異不顯著，基本不存在抑菌作用。

　　2.2 MIC和MBC的測(cè)定用滴注法測(cè)定了白花蛇舌草提取物對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、鐮刀菌4種供試菌的MIC和MBC。結(jié)果見表2。表2 白花蛇舌草提取物對(duì)4種供試菌的MIC及MBC(略)

　　綠膿桿菌和其他革蘭氏陰性桿菌的細(xì)胞壁外，有一層主要由蛋白質(zhì)組成的外膜，外膜蛋白可分為結(jié)構(gòu)蛋白、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和微孔蛋白等，它們具有不同的功能，有的轉(zhuǎn)運(yùn)營(yíng)養(yǎng)成分、無機(jī)鹽等進(jìn)入菌體，有些藥物和物質(zhì)可以通過微孔蛋白形成的孔道進(jìn)入菌體，但一些大分子物質(zhì)則不能通過外膜進(jìn)入菌體，某些大分子的藥物也不能通過外膜進(jìn)入菌體，這是抗綠膿桿菌藥物較少的原因之一。因此，尋找抑制綠膿桿菌和其他革蘭氏陰性桿菌外膜合成的藥物，可使一些原來不能透過綠膿桿菌外膜的藥物進(jìn)入菌體，抑制菌體的生長(zhǎng)繁殖，也可尋找既能抑制外膜合成，又有抗菌作用的藥物[7]。從表2看出，白花蛇舌草提取物對(duì)供試菌綠膿桿菌的MIC為0.25%，MBC為0.5%，表明其為具有抗菌作用的藥物，是否為抑制外膜合成的藥物，機(jī)制尚不清楚，也有可能是黃酮類化合物的存在顯示其抑菌活性[8]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，白花蛇舌草的醇提物中含有熊果酸，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞均有明顯的細(xì)胞毒性[9]。

　　3 結(jié)論[10～12]

　　白花蛇舌草95%乙醇提取物對(duì)各種供試菌的抑制效力不同，對(duì)綠膿桿菌的抑菌效果較好，37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，20%的提取物醋酸乙酯溶解液的抑菌環(huán)直徑為(18.68±0.56)mm，大腸桿菌的為(12.78±0.44)mm，其對(duì)這兩種供試菌的MIC和MBC值也表明白花蛇舌草抗革蘭氏陰性桿菌的醫(yī)用前景。有關(guān)提取物中主要活性成分的結(jié)構(gòu)及抑菌機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

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