摘要：目的觀察紫鉚因對動脈粥樣硬化小鼠血脂水平的影響。方法6周齡雄性小鼠，采用高脂飲食法建立動脈粥樣硬化模型，造模成功后隨機分為模型組、紫鉚因低劑量組、紫鉚因高劑量組。低劑量組給予紫鉚因0.5g/kg體質量，高劑量組給予紫鉚因1.0g/kg體質量，對照組給予等量的生理鹽水。連續給藥12周后腹主動脈取血，分離血清。酶偶聯比色法測定血清總膽固醇(totalcholesterol，TC)、甘油三醋(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(lowdensitylipoproteincholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(highdensitylipoprotein-cholesterol，HDL-C)水平。結果與模型組相比，紫鉚因低劑量組和高劑量組均顯著降低血清中TC、TG和LDL~C的含量，但對HDL~C含量無影響。結論紫鉚因可以調節血脂水平。

　　關鍵詞：動脈粥樣硬化;小鼠;紫鉚因;血脂水平

　　紫鉚因于1961年由D.G.Roux首次從植物中提純，其化學名稱3，4，2’，4’-四羥基查爾酮，分式:(OH)2C6H3CH:CHCOC6H3(OH)2，紫鉚因具有廣泛的生物學活性，如抗炎、抗纖維化等。已有實驗結果表明，紫鉚因可以抑制黃噪呤化酶的活性鐵誘導的脂質過氧化作用以及銅催化的人類低密度脂蛋白的氧化作用，是比牛育酌更有效的抗氧化劑[1]。在體外實驗中，紫鉚因是抗脂質和低密度脂蛋白(LDL)過氧化的強效抗氧化劑。紫鉚因抑制大鼠腦勻漿中鐵誘導的脂質過氧化。

　　紫鉚因以濃度依賴性方式抑制銅催化的人低密度脂蛋白(LDL)的氧化。紫鉚因是一種鐵離子和銅離子的螯合劑。及時消除機體內過多的氧化自由基，能夠有效預防由自由基引發的一系列疾病，如癌癥、動脈硬化、糖尿病、心血管病等，雖然紫鉚因在臨床應用過程中具有良好的治療效果，但是其治療作用的相關機制并不清楚，且少有相關的基礎理論研究報道。本課題采用動脈粥樣硬化小鼠模型，研究紫鉚因對血脂水平的調節作用。

　　1材料與方法

　　1.1實驗動物

　　健康SPF級別6周齡雄性小鼠，長沙醫學院實驗動物中心提供。

　　1.2藥物與試劑

　　紫鉚因由廣東華南藥業有限公司生產(國藥準字Z20040093)。總膽固醇(TC)測試盒(A111-1)、甘油三酯(TG)測試盒(A110-1)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL~C)測試盒(A112-1)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測試盒(A113-1)購自南京建成生物工程研究所。

　　1.3主要儀器

　　全波長酶標儀(MultiskanSpectrum，美國ThermoFisher公司)。

　　1.4方法

　　1.4.1選取50只昆明種雄性健康和體重相近的小鼠，將其隨機均勻分為5組，自由飲水，分組如下：(1)正常對照組(A組):連續3天等體積注射生理鹽水并喂養基礎顆粒飼料。(2)AS模型組(B組):喂養造模飼料(基礎顆粒飼料+3%豬油+1%膽固醇)并連續3天采取腹腔注射維生素D3。(3)紫鉚因低劑量組(C組):喂養造模飼料及連續3天腹腔注射維生素D3，并添加入低劑量紫鉚因一直持續12周。(4)紫鉚因高劑量組(D組):喂養造模飼料及連續3天腹腔注射維生素D3，并添加入高劑量紫鉚因一直持續12周。以上3組分別于喂飼4周、8周、12周時測體重(實驗前及實驗過程中每周均稱量，每次稱量3次，取平均值，均由同一人操作并記錄)后處死并進行解剖取材。

　　1.4.2血樣采集及生化分析：小鼠用10%水合氯醛麻醉后，剪開下腹腔，暴露腹主動脈，取血0.5~1.0mL。室溫靜置2h。放入離心機，3000r/min，4°C離心20min，取上清，檢測TC、TG、HDL-C、LDL~C等生化指標。

　　1.5統計方法

　　實驗數據采用SPSS22.0軟件進行統計，結果以(x±s)表示。用單因素方差分析(one~wayanalysisofvariance，ANOVA)進行組間樣本均數比較，P3<0.05表示具有統計學意義。

　　2結果

　　2.1紫鉚因對小鼠總膽固醇含量的影響

　　總膽固醇是指血液中所有脂蛋白所含膽固醇的總和，是反應血脂水平的重要指標之一。結果顯示，與模型組比較，紫鉚因小劑量組和紫鉚因大劑量組的TC水平顯著降低且有統計學意義(P<0.01，n=7)。注：與模型組相比，**P<0.01。

　　2.2紫鉚因對小鼠甘油三酯含量的影響

　　甘油三脂是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，是人體含量最多的脂類，其水平高低與動脈粥樣硬化程度密切相關。根據血清生化分析結果顯示，與模型組相比，紫鉚因小劑量組和紫鉚因大劑量組均能顯著降低血漿中的TG的含量，差異有統計學意義(**P<0.01，n=7)。注：與模型組相比，**P<0.01。

　　2.3紫鉚因對小鼠低密度脂蛋白膽固醇含量的影響

　　低密度脂蛋白膽固醇高于正常水平時，易聚集于大中動脈分支及彎曲處，與動脈粥樣硬化的生成有直接關系。與模型組比較，紫鉚因小劑量組LDL~C水平顯著降低，有統計學差異(**P<0.01，n=7);紫鉚因大劑量組LDL~C水平顯著降低，有統計學差異(磁P<0.001，=7)。注：與模型組相比，**P<0.01。

　　2.4紫鉚因對小鼠高密度脂蛋白膽固醇含量的影響

　　高密度脂蛋白膽固醇是一種抗動脈粥樣硬化的脂蛋白，可將膽固醇從肝外組織轉運到肝臟進行代謝，由膽汁排出體外。實驗結果表明，與模型組比較，紫鉚因小劑量組和紫鉚因大劑量組的血清HDL~C水平沒有明顯差異(P>0.05，n=7)。

　　3討論

　　動脈粥樣硬化是腦卒中及外周血管疾病的主要病理基礎，而脂質代謝紊亂是動脈粥樣硬化的一個重要因素[2]。高血脂癥中大量脂質進入血管內膜下引發免疫炎癥反應，導致血管內皮細胞損傷，血漿脂蛋白進入血管內膜，引起巨噬細胞吞噬反應、血管平滑肌細胞增生，形成斑塊，斑塊堵塞腦血管，則引發腦卒中[3-4]。紫鉚因(butein)是來源廣泛的多酚類化合物，具有抗腫瘤、抗血管生成、抗氧化等多種生物學活性。

　　紫鉚因是一種植物來源的多酚類化合物，大量存在于腰果樹，降香黃檀，漆樹和箭葉錦雞兒等植物中，但其具體的作用機理并不清楚。本實驗通過對動脈粥樣硬化小鼠血脂水平的檢測，探討紫鉚因治療腦卒中的相關機制。TC是指血液中各脂蛋白所含膽固醇的總和，結果顯示，紫鉚因小劑量組和紫鉚因大劑量組均可降低TC含量。低密度脂蛋白以膽固醇為內核，含4536個氨基酸殘基的載脂蛋白B100覆蓋于表面，借助非極性的疏水基團與內核相連。當血漿LDL水平高于正常時會集聚于大中動脈分支彎曲處，進入損傷血管內膜，氧化生成Ox-LDL。Ox-LDL可對內皮細胞結構和功能的完整性造成破壞，促進動脈內膜的脂質沉淀，是動脈粥樣硬化的關鍵啟動因素。研究結果顯示，紫鉚因小劑量組和紫鉚因大劑量組可以顯著降低LDL~C的水平。

　　此后，研究人員又進一步觀察了紫鉚因對HDL~C的調節作用[5]。HDL~C參與膽固醇逆向轉運，將巨噬細胞、血管平滑肌等肝外組織細胞內膽固醇攜帶至肝臟轉化為膽汁酸或直接通過膽汁酸排出體外，從而減輕整體的脂質負荷，所以普遍認為HDL~C具有抗動脈粥樣硬化作用[6-7]。但HDL~C具有雙重作用，其在生理狀態下，HDL的抗動脈粥樣硬化功能占優勢，處于主導地位[8]。而在病理狀態下，HDL-C的結構成分會發生病理變化，其理化性質及功能狀況相應改變，使HDL~C抗動脈粥樣硬化作用減弱甚至逆轉[9]。

　　本研究結果顯示，與模型組相比，紫鉚因給藥組的HDL<水平沒有顯著增加或減少，無統計學差異。提示紫鉚因用于治療動脈粥樣硬化過程中可能和HDL~C水平無關。TG是血漿中各脂蛋白所含脂肪的總和，其升高時膽固醇酯轉移蛋白活性增加，促進TG含量在HDL及LDL中表達增加，HDL和LDL中的TG會被肝脂酶和脂蛋白脂酶進一步水解形成小而致密的HDL和LDL顆粒，LDL顆粒則在血管壁沉積，促進動脈粥樣硬化的發生。研究結果顯示，紫鉚因小劑量組和大劑量組均可顯著降低TG的水平。

　　綜上所述，紫鉚因可以顯著降低總膽固醇、低密度脂蛋白及甘油三脂的水平，從而減少動脈粥樣硬化的發生發展，提示該途徑可能是紫鉚因治療腦卒中的作用機制之一。

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　　參考文獻：

　　[1]司小衛.依達拉奉聯合他汀藥物對老年動脈粥樣硬化性腦梗死神經功能及血管內皮功能的影響[J].包頭醫學，2020，44(01):41-43.

　　[2]SelcukGormez，RefikErdim，GokceAkan，BarısCaynak，CihanDuran，DemetGunay，VolkanSozer，FatmahanAtalar.Relationshipsbetweenvisceral/subcutaneousadiposetissueFABP4expressionandcoronaryatherosclerosisinpatientswithmetabolicsyndrome[J].CardiovascularPathology，2020，46.

　　作者：鄭敏1賀星2向壹瀏3張生輝4吳澤軍5李麗